Главное меню
Главная О нас Сайты/файлы Добавить Карта книг Карта сайта
Реклама
Книги Фантастики
fantbooks.com -> Книги на сайте -> Эзотерика -> Азимов А. -> "Путеводитель по науке. От египетских пирамид до космических станций" -> 217

Путеводитель по науке. От египетских пирамид до космических станций - Азимов А.

Предыдущая << 1 .. 211 212 213 214 215 216 < 217 > 218 219 220 221 222 223 .. 356 >> Следующая

Так, отщепляя по одной аминокислоте с каждого конца, Сангер смог определить концевые аминокислоты для некоторых пептидов.
Сангер продолжил атаку на полипептидную цепь по всей ее длине. Он работал с инсулином, поскольку, с одной стороны, этот белок имеет очень важное значение для функционирования организма, а с другой - его размеры относительно небольшие: молекулярная масса инсулина в его простейшей форме составляет всего 6000. Обработка инсулина динитрофенолом показала, что этот белок содержит две различные N-концевые аминокислоты, на основании чего можно было сделать вывод, что состоит он из двух полипептидных цепей. Цепи соединяются между собой молекулами цистина. Обработав инсулин реактивом, который разрушает связь между двумя атомами серы в цистине, Сангер расщепил молекулу инсулина на две отдельные полипептидные цепи. У одной цепи на N-конце был глицин (ее назвали A-цепью), у другой - фенилаланин (ее назвали Б-цепью).
Сангер и его коллега Ганс Таппи были первыми, кто расщепил полипептиды на отдельные аминокислоты и идентифицировал 21 аминокислоту, из которых состоит A-цепь, и 30 аминокислот, из которых состоит Б-цепь. Затем, чтобы определить, в какой последовательности эти аминокислоты соединяются в цепи, исследователи расщепили полипептид не на отдельные аминокислоты, а на фрагменты, состоящие из двух или трех аминокислот. Это было достигнуто путем так называемого частичного гидролиза, при котором разрушались только наиболее слабые из пептидных связей, или обработкой его пищеварительным соком, который разрушает связи только между определенными аминокислотами, оставляя остальные нетронутыми.
С помощью этих ухищрений Сангеру и Таппи удалось расщепить пептидные цепи на большое количество фрагментов. Например, из Б-цепи было получено 48 различных фрагментов, 22 из них содержали по две аминокислоты, 14- по три и 12- более трех аминокислот.
Затем маленькие пептиды выделяли, расщепляли на аминокислоты, которые, в свою очередь, разделяли хроматографией на бумаге. Теперь ученые могли приступить к определению аминокислотной последовательности во фрагментах. Допустим, они имели дело с дипептидом, состоящим из валина и изолейцина. Возникал вопрос: каков их порядок: Вал-Иле или Иле-Вал? Другими словами, какая аминокислота является N-концевой: валин или изолейцин? (Принято считать N-конец полипептидной цепи левым и соответственно N-концевую аминокислоту - первой, поскольку, как правило, счет ведется слева направо.) Разрешить этот вопрос можно было с помощью динитрофенола. Если этот реагент свяжется с валином, то N-концевой аминокислотой является валин и последовательность аминокислот - Вал-Иле, если же остаток динитрофенола обнаружится в изолейцине, то последовательность аминокислот Иле-Вал.
Последовательность в трехаминокислотном фрагменте также можно установить. Допустим, фрагмент состоит из лейцина, валина и глутаминовой кислоты. С помощью динитрофенола можно определить N-концевую аминокислоту. Допустим, это лейцин, тогда последовательность аминокислот должна быть Лей-Вал-Глу или Лей-Глу-Вал. Для того чтобы выбрать правильный вариант, каждый из двух трипептидов синтезируют, затем наносят их на бумагу, проводят хроматографию и смотрят, который окажется на том же месте, где расположено пятно, полученное при хроматографии исследуемого фрагмента.
Что касается более крупных пептидных фрагментов, то их можно расщепить на более мелкие и провести такой же анализ.
После определения последовательности аминокислот во фрагментах, на которые расчленили инсулин, следовало собрать эти фрагменты в правильном порядке, чтобы получилась исходная полипептидная цепь, то есть решить задачу, подобную головоломке. Существовало несколько путей, которые могли бы привести к разрешению этой проблемы. Один из них был таков: допустим, в A-цепи содержится только один остаток аланина. В то же время среди фрагментов A-цепи аланин обнаруживался дважды: в комбинациях Ала-Cep и Цис-Ала. Это означает, что в исходной A-цепи порядок аминокислот таков: Цис-Ала-Сер.
Идя такими путями, Сангер и Таппи постепенно собрали все фрагменты воедино. Два года трудились они над точной идентификацией фрагментов и их правильным воссоединением в единую структуру, и к 1952 году работа над определением аминокислотной последовательности А- и Б-цепей инсулина была завершена. Затем было выяснено, каким образом две цепи соединяются друг с другом. В 1953 году они доложили о триумфальном завершении работы по расшифровке структуры инсулина. Впервые в истории науки была установлена полная аминокислотная последовательность в столь важном белке. За проделанную работу Сангер в 1958 году был удостоен Нобелевской премии в области химии.
Биохимики немедленно воспользовались методом Сангера для определения структуры других белковых молекул. В 1959 году была установлена структура рибонуклесізы - одноцепочечного белка, состоящего из 124 аминокислот, в I960 году - белковой единицы вируса табачной мозаики, включающей в себя 158 аминокислот. В 1964 году была расшифрована структура трипсина - белка, молекула которого состоит из 223 аминокислот. К 1967 году метод определения аминокислотной последовательности был автоматизирован. Австралийский биохимик, швед по происхождению, П. Эдман сконструировал аминокислотный анализатор - прибор, с помощью которого, имея всего 5 миллиграммов белка, можно было последовательно идентифицировать аминокислоты, из которых он состоит.
Предыдущая << 1 .. 211 212 213 214 215 216 < 217 > 218 219 220 221 222 223 .. 356 >> Следующая
Rambler's Top100
Авторские права © 2010 FantBooks.
Все права защищены.
Книги
Древневосточная литература Игры Фантастика Философия Фэнтези Эзотерика
Новые книги
"" ()

Вороневич В. "Чакры" (Эзотерика)

Голицын В. "Окно на тот свет. Посланники потустороннего мира" (Эзотерика)

Стюарт М. "Принц и пилигрим: Фантастические романы" (Фантастика)

Стюарт М. "Принц и пилигрим: Фантастические романы" (Фантастика)